Что такое Счетная палата?

Что такое счетная камера?

Рисунок 1. Обзор калькулятора клеток крови

Счетная камера — это инструмент, используемый для подсчета клеток. Ее также называют гемоцитометром.

Ее используют для этой цели, поскольку необходимо подсчитать клетки перед методами слияния клеток или операциями с культурой клеток.

Размер клеток варьируется в зависимости от объекта измерения, например, клеток крови (эритроцитов, лейкоцитов и т. д.), лимфоцитов или других культивируемых клеток. По этой причине ширина шкалы счетной камеры также различается в зависимости от измеряемого объекта.

Применение счетных камер

Счетные камеры используются в исследованиях и разработках клеточных технологий. Подсчет количества клеток позволяет вычислить плотность клеток, показатели выживаемости и другие необходимые значения. Это всегда делается в качестве предварительной подготовки к операциям с культурой клеток, таким как трансфекция, технология слияния клеток, криоконсервация и т. д.

Принцип работы счетных камер

Счетные камеры имеют ряд равноудаленных делений разной ширины, каждое из которых может быть использовано для расчета числового значения. Концентрация суспензии регулируется таким образом, чтобы в рамке размером 1 мм с каждой стороны находилось около 100 клеток, и подсчитывается количество жизнеспособных клеток в рамке, состоящей из 16 квадратов.

Как использовать счетные камеры и покровное стекло

Рисунок 2. Изображение того, как выглядит клетка

1. Счетные камеры

Сначала клетки, которые нужно наблюдать, собираются и ресуспендируются в культуральной среде, из которой собирается клеточная суспензия и окрашивается красителем для классификации живых и мертвых клеток. Мертвые клетки окрашены, а живые — нет, поэтому наличие или отсутствие цвета используется для различения живых и мертвых клеток.

Важно отрегулировать концентрацию суспензии до соответствующего уровня, чтобы в рамке было около 100 клеток, потому что если концентрация слишком высокая, ее трудно измерить, а если слишком низкая, ее нельзя измерить правильно. Первоначально подсчитывается количество жизнеспособных клеток в квадратной рамке размером 1 мм, самая большая из которых состоит из 16 квадратов.

Измеряя количество живых и мертвых клеток с помощью этой операции, можно рассчитать жизнеспособность клеток.

2. Покровное стекло

Счетные камеры используются с приклеенным к ним покровным стеклом. Покровное стекло следует промыть этанолом и высушить на воздухе перед использованием. Непосредственно перед использованием слегка смочите покровное стекло водой и поместите его на поверхность шкалы счетных камер. Соблюдая осторожность, чтобы не разбить покровное стекло, слегка надавите, как будто вы трете покровное стекло пальцами, чтобы оно плотно прилегало к счетным камерам.

На этом этапе проверьте наличие колец Ньютона, чтобы убедиться, что стекло прочно приклеено. Кольца Ньютона — это радужные интерференционные полосы, которые возникают, когда стекла с одинаковой процентной кривой на их поверхностях накладываются друг на друга. Они не видны, если пыль или другие загрязнения проникли между счетными камерами и покровным стеклом.

Если кольца Ньютона не могут быть подтверждены, протрите поверхность счетных камер и покровного стекла марлей или подобной тканью, смоченной соответствующим количеством этанола, и повторите ту же процедуру. Обратите внимание, что глубина расчетной камеры изменится из-за грязи в ней, и точный подсчет будет невозможен.

Некоторые одноразовые изделия не требуют покровного стекла. В таких случаях можно отказаться от труда по созданию кольца Ньютона.

Типы счетных камер

Рисунок 3. Различные типы весов

1. Счетные камеры типа Бюркера-Тюрка

Существует несколько типов счетных камер, каждый из которых имеет различную надпись на шкале и глубину расчетной камеры. Наиболее часто используемый тип — счетные камеры типа Бюркера-Тюрка.

Это дуплексный калькулятор с двумя расчетными камерами, который может подсчитывать широкий спектр клеток, включая не только эритроциты и лейкоциты, но и сперму, бактерии, дрожжи, планктон и культивируемые клетки.

В счетных камерах типа Бюркера-Тюрка объем каждой расчетной камеры составляет 0,9 мкл, а линии шкалы спроектированы таким образом, что каждая сторона шкалы имеет длину и ширину 3 мм.

Эта единственная сторона дополнительно разделена на девять блоков размером 1 мм x 1 мм. Средний блок в основном используется для подсчета клеток с большими абсолютными числами, таких как эритроциты, в то время как четыре угловых блока используются для подсчета клеток с относительно небольшими абсолютными числами, таких как лейкоциты и культивируемые клетки.

2. Другие счетные камеры

Другие типы счетных камер включают тип Томаса, представляющий собой однокамерный одноступенчатый калькулятор, и модифицированный тип Нойбауэра, представляющий собой двухступенчатый калькулятор, аналогичный типу Бюркера-Тюрка, но с более простыми линиями градуировки.