Что такое набор для ИФА?
Набор для ИФА — это один из методов иммуноферментного анализа с использованием антител для количественного определения с помощью ИФА (иммуноферментного анализа).
ИФА — это метод количественного определения следовых количеств биологических веществ с использованием реакции антиген-антитело.
Применение наборов для ИФА
Рисунок 1. Обзор ИФА
Наборы ELISA часто используются в области биологии с точки зрения того, что следовые количества биологических веществ могут быть обнаружены с высокой точностью с помощью реакции антиген-антитело. Например, они используются для измерения белков крови, таких как цитокины, хемокины и факторы роста, или в иммуноонкологии для измерения растворимых молекул иммунных контрольных точек для выяснения статуса иммунитета к раку.
В нейробиологии они используются для количественного определения белков Aβ, тау и α-синуклеина, которые, как известно, вызывают нейропатию.
Доступны и другие наборы ELISA, такие как наборы для специфического фосфорилирования и наборы иммуноглобулинов, что позволяет вам выбрать набор ELISA, который лучше всего подходит для вашего исследования и целей.
Конкурентный анализ ELISA также подходит для измерения гистамина, пестицидов, диоксина и т. д.
Принцип наборов ELISA
ELISA использует антитело или антиген, который специфически связывается с измеряемым веществом (реакция антиген-антитело). Наконец, антитело (или антиген), меченое ферментом, используется для обнаружения и оценки активности фермента путем измерения поглощения.
Измеряя активность фермента, можно количественно определить концентрацию фермента в растворе, вещества в реагентах, участвующих в реакции антиген-антитело, и целевое вещество.
Существует четыре основных метода: прямой метод, непрямой метод, сэндвич-метод и конкурентный метод.
Рисунок 2. Прямые и непрямые методы
1. Прямой метод
В этом методе целевой антиген или антитело находится в твердой фазе на микропланшете, и меченый антиген или антитело напрямую взаимодействует с ним. После нанесения антигена или антитела планшет промывается и определяется активность фермента на микропланшете. Поскольку не требуется вторичного антитела, этот метод может быть выполнен в один этап и за короткое время.
2. Непрямой метод
Сначала на твердофазный микропланшет наносят антитело, специфичное к целевому антигену. Затем определяют ферментативную активность фермента на меченом вторичном антителе. Этот метод отличается повышенной чувствительностью, но требует больше времени, чем прямой метод.
Рисунок 3. Сэндвич-метод и конкурентный метод
3. Сэндвич-метод
Микропланшет, покрытый антителом, которое связывается с целевым веществом в образце, используется для реакции с образцом в качестве антигена. Затем образец реагирует с другим антителом, меченым ферментом, и избыток антитела смывается перед измерением активности фермента на микропланшете.
Необходимо выбрать антитело, которое имеет другой сайт распознавания антигена, чем антитело, используемое для твердой фазы, и антитело, меченое ферментом.
Преимущество метода сэндвича заключается в том, что специфичность реакции выше, чем у прямого метода, что приводит к более высокой точности обнаружения.
4. Конкурентный метод
Конкурентный метод может использоваться для измерения малых молекул, которые трудно обнаружить с помощью метода сэндвича, или когда есть только один сайт связывания для антитела.
Антитело, которое связывается с целевым веществом, покрывается твердой фазой, и образец одновременно реагирует с меченым антигеном известной концентрации. Если образец содержит большое количество целевого вещества, поглощение уменьшается, поскольку мало меченого ферментом антигена, который может связываться с антителом.
И наоборот, если образец содержит меньше целевого вещества, больше меченого ферментом антигена доступно для связывания с антителом, что приводит к увеличению поглощения.
Как выбрать набор для ИФА
Как упоминалось выше, поскольку обнаружение выполняется с использованием специфических реакций антиген-антитело, первым предварительным условием является использование продукта, который использует правильную комбинацию реагентов для образца. Кроме того, независимо от того, используются ли прямые, непрямые, сэндвич-методы или конкурентные методы, каждый метод имеет свои преимущества и недостатки, поэтому необходимо выбрать наиболее предпочтительный метод в соответствии с целью измерения.
Твердофазное присоединение к микропланшету обычно осуществляется посредством гидрофобного взаимодействия или ковалентной связи, и важно выбрать правильный микропланшет в соответствии с режимом связывания. Помимо гидрофобных и гидрофильных типов, доступно много типов, включая те, которые обработаны амино- и карбоксильными группами для приложений ковалентного связывания.
