Что такое ИФА?

Что такое ИФА?

ИФА — это метод качественного и количественного анализа белков, таких как антигены и антитела, присутствующих в жидких растворах. ИФА — это аббревиатура для иммуноферментного анализа, и это тип иммунологического анализа. ИФА использует специфичность антигенов и антител и является высокоточным методом как качественного, так и количественного анализа.

ИФА широко используется для количественного анализа антигенов и антител, поскольку доступны коммерческие наборы. В целом, контроль температуры важен для наборов ИФА, поэтому следует следить за тем, чтобы наборы не хранились при слишком разных температурах в зависимости от местоположения холодильника, в котором они хранятся, или чтобы они не замерзали из-за чрезмерного холода.

В зависимости от метода ИФА может потребовать много этапов перед количественным анализом, но в последнее время были разработаны полностью автоматизированные анализаторы, и время, необходимое для анализа, сократилось.

Применение ИФА

ELISA широко используется в области биотехнологии. Например, ELISA используется для анализа антигенов и антител в крови, такой как плазма и сыворотка. Собирая образцы крови и измеряя значения аутоантител в ELISA, можно диагностировать заболевания или определять титры антител из-за вакцинации. По этой причине ELISA широко используется при анализе анализов крови, проводимых в больницах, и даже в последнее время все больше и больше заболеваний были идентифицированы с помощью ELISA в ходе исследований.

Его также можно использовать для определения наличия или отсутствия аллергенов в пище или для определения наличия или отсутствия пищевой аллергии путем сбора образцов крови у субъекта.

В то время как метод ПЦР с использованием ДНК стал хорошо известен как тест на антигены и антитела коронавируса, анализ ELISA также доступен в наборах и других формах.

Принцип ELISA

ELISA использует реакцию антиген-антитело для проведения анализа.

Сначала измеряемый антиген объединяется с антителом, которое имеет специфичность к антигену. Для обнаружения связанного антитела антитело, меченое специфическим ферментом, далее связывается.

Затем антиген, антитело и связанное с ферментом вещество, которые необходимо измерить, смешивают с субстратом, который реагирует с ферментом, вызывая изменение цвета. Цветовой тон изменяется в соответствии с количеством измеряемого вещества, а спектр поглощения измеряется с помощью абсорбционного спектрофотометра для количественного и качественного анализа.

Антитела IgG часто используются в иммунологических методах анализа, включая ИФА.

Методы ИФА

Существует несколько методов ИФА, и доступно множество типов наборов. Самый простой прямой метод представлен здесь. Основной поток измерения не сильно отличается от других.

Сначала антитело, которое связывается с измеряемым веществом, адсорбируется на микропланшете.

Определенное количество жидкого образца добавляется на микропланшет с помощью пипетки. Температура контролируется в инкубаторе, и образец реагирует и связывается с антигенами и антителами на микропланшете. Избыточные антитела смываются.

Связанные антитела далее реагируют со специфическими ферментами. Для обнаружения активности фермента добавляется субстрат с другим спектром поглощения при связывании с ферментом, и спектр поглощения после реакции измеряется и анализируется. Во многих случаях пероксидаза (HRP), полученная из хрена, используется в качестве субстрата для проявления цвета, и необходимо соблюдать осторожность, чтобы не использовать пробирки для сбора крови, покрытые азидом натрия или другими ингибиторами при использовании HRP.

Наконец, спектр поглощения измеряется и анализируется с помощью абсорбционного спектрофотометра.

Оборудование для ИФА

ИФА часто требует много шагов для точного анализа в зависимости от измеряемого вещества, и каждый шаг повторяется, например, аликвотирование и промывка. Также требуются пипетки, микропланшеты, инкубаторы, анализаторы поглощения и т. д.

В последнее время были разработаны устройства, которые позволяют одному устройству выполнять все функции, от пипетирования до анализа поглощения. Возможность выполнять измерения полностью автоматически, без вмешательства человека, снижает количество ошибок и экономит время и трудозатраты.